Cinnamaldeide ed Eugenolo contro Candida : studio in vitro 

Il risultato principale è che cinnamaldeide ed eugenolo sono stati i composti più attivi nel sistema studiato. Entrambi hanno inibito tutti i 18 ceppi. Per la cinnamaldeide, la zona media senza crescita attorno al disco era 69 mm, la MIC media 50,05 mg/L e la concentrazione minima fungicida, o MFC, 109,26 mg/L. La MFC indica la quantità necessaria a non recuperare crescita fungina nel test successivo. Per l'eugenolo, i valori medi sono stati 35,2 mm, 455,42 mg/L e 690,09 mg/L.

Nel ceppo di Candida albicans scelto per la prova nel tempo, l'eugenolo ha eliminato le cellule vitali entro un'ora e la cinnamaldeide entro quattro ore. Insieme, 20,48 mg/L di cinnamaldeide e 41,40 mg/L di eugenolo hanno dato un FICI di 0,625. Poiché un FICI tra 0,5 e 1 indica additività, il dato mostra che nel modello le dosi potevano essere ridotte mantenendo l'inibizione. Non dimostra invece una sinergia in senso stretto, definita dagli autori come FICI pari o inferiore a 0,5. L'alfa-pinene ha avuto attività minore; limonene ed eucaliptolo non hanno fornito risultati comparabili.

La ricerca è rilevante perché affronta una domanda sperimentale precisa: più componenti aromatici possono avere un'attività antimicotica diversa rispetto alle sostanze isolate? Qui la risposta è circoscritta alle colture: la coppia cinnamaldeide-eugenolo ha mostrato un effetto additivo contro il ceppo usato nel test di combinazione. Questo sostiene l'idea che la composizione chimica di una miscela possa contare, senza trasformarla in prova di trattamento.

Il dato si collega a un possibile passaggio biologico: quando la membrana del lievito perde integrità o cambia la disponibilità di ergosterolo, una molecola essenziale per la struttura della membrana fungina, la cellula può perdere componenti interni e non proliferare. Studi indipendenti hanno esplorato questo passaggio in modelli di Candida [1]. Resta però necessario distinguere un segnale misurato in provetta da un effetto in un tessuto umano, dove assorbimento, metabolismo, irritazione locale e risposta immunitaria cambiano radicalmente il contesto.

Questo è uno studio in vitro, cioè svolto su microrganismi coltivati in laboratorio. Non include persone, non confronta una terapia con placebo e non misura guarigione, recidive, sintomi o sicurezza clinica. Perciò non permette di concludere che la miscela prevenga o curi candidosi intestinali, vaginali, orali o invasive.

Il test di combinazione è stato effettuato sul ceppo 15 di Candida albicans; non è quindi una dimostrazione identica per tutte le specie e tutti i ceppi. Inoltre, i test sono stati condotti in duplicato, un elemento che limita la precisione delle stime. L'assenza di effetto su Lactobacillus acidophilus alle concentrazioni provate è un segnale preliminare favorevole nel modello, non una prova di selettività nel microbiota umano. Infine, la miscela è stata additiva e non sinergica: usare questi termini come equivalenti renderebbe il risultato più forte di quanto riportato dagli autori.

Un primo tassello riguarda la membrana fungina. Khan e colleghi hanno studiato in vitro un ceppo di Candida albicans con microscopia elettronica, citometria a flusso e test biochimici. Cinnamaldeide ed eugenolo hanno danneggiato parete e membrana e, a metà della rispettiva MIC, hanno ridotto la biosintesi di ergosterolo del 67,41% e del 76,23%. Il risultato sostiene il passaggio da esposizione molecolare a perdita di integrità cellulare ipotizzato nello studio di Saracino; la conferma è meccanicistica e moderata, ma basata su un singolo ceppo e non su un organismo umano [1].

Un secondo studio ha esaminato due ceppi di Candida albicans, inclusi biofilm già formati, cioè comunità microbiche aderenti e più difficili da controllare. Eugenolo e cinnamaldeide hanno ridotto il biofilm e hanno mostrato interazioni favorevoli con fluconazolo; i FICI contro biofilm variavano fino a 0,14 per eugenolo e 0,312 per cinnamaldeide in specifici confronti. Questo non verifica la stessa miscela dello studio principale, ma conferma che entrambe le molecole possono restare attive in una condizione sperimentale più complessa. Il limite è l'assenza di dati clinici [2].

Alves e colleghi hanno poi valutato cinnamaldeide contro più specie di Candida, biofilm multispecie e cellule umane in coltura. Hanno osservato attività fungicida e antibiofilm; le simulazioni al computer hanno suggerito possibili interazioni con proteine coinvolte nella membrana. Questa evidenza è indiretta per l'associazione con eugenolo: il docking molecolare indica soltanto che una molecola potrebbe adattarsi a una zona proteica, non prova che il legame avvenga nell'organismo. Il livello di conferma resta quindi sperimentale [3].

I risultati non sono uniformi in ogni specie, combinazione e modello. De Sousa e colleghi hanno esaminato 24 ceppi di Candida auris in vitro. Eugenolo e cinnamaldeide hanno avuto azione fungicida, ma l'associazione di ciascuno con itraconazolo è risultata antagonista oppure priva di interazione rilevabile. Inoltre, la cinnamaldeide è stata citotossica per cellule di linea Vero,alle concentrazioni attive contro il lievito, mentre l'eugenolo non lo è stato nel medesimo sistema. Questo non smentisce l'effetto additivo osservato da Saracino e colleghi, ma mostra che la risposta dipende dal composto associato, dalla specie fungina e dal modello cellulare [4].

In un successivo studio su biofilm di Candidozyma auris, eugenolo e cinnamaldeide hanno ridotto la biomassa nella maggior parte degli isolati clinici, ma l'attività metabolica è aumentata nella maggioranza degli isolati durante il trattamento. Gli autori hanno proposto, senza dimostrarla definitivamente, un'eteroresistenza, cioè la presenza di sottogruppi cellulari con sensibilità diversa. Il dato invita a non equiparare riduzione della biomassa e completa inattivazione del biofilm. Non sono state individuate evidenze direttamente discordanti sufficientemente pertinenti sulla stessa miscela cinnamaldeide-eugenolo contro gli stessi ceppi; ciò non dimostra l'assenza di risultati contrari [5].